Cílem naší práce bylo vyzkoušet novou homogenní enzymatickou metodu na stanovení celkového homocysteinu v plazmě na biochemickém analyzátoru Synchron LX 20, Beckman Coulter a porovnat výsledky stanovené touto metodou s výsledky dosud používaného imunostanovení na analyzátoru AxSym, Abbott. V naší laboratoři jsme vyzkoušeli soupravu kalifornské firmy Carolina, Liquid Chemistries Corp.: HCY (kat. č. CC202). Princip stanovení: Prvním krokem při stanovení je reakce homocysteinu a L-serinu za vzniku cystationinu. Reakce je katalyzována cystationin-β-syntasou.V následující reakci je cystationin za katalýzy cystationin-β-lyasy konvertován na homocystein, pyruvát a amoniak. Kinetika produkce pyruvátu je monitorována prostřednictvím reakce s NADH+, katalyzované laktatdehydrogenasou. Změna absorbance je přímo úměrná koncentraci homocysteinu ve vzorku. Parametry metodiky na analyzátoru Synchron LX 20, Beckman Coulter jsou následující – typ reakce: kinetika; primární vlnová délka: 340 nm; sekundární: 380 nm; reakce je třísložková, konečná koncentrace v testu: laktatdehydrogenasa (LD) > 65 KU/l, serin = 13 mmol/l, NADH = 1,06 mmol/l, cystationin-β-syntasa > 28 KU/l, cystationin- β-lyasa > 8 KU/l. Poměr vzorku a reagencie 1:10. Metoda byla kalibrována na 2 kalibrátory ze soupravy (0,0 µmol/l a 26,5 µmol/l). Pro kontrolu kvality byly použity kontrolní materiály firmy Abbott, Homocysteine controls L,M,H (š, 90012HP00, exp. 2003-09-19) s koncentracemi 7,0, 12,5 a 25 µmol/l. Přesnost v sérii byla měřena na koncentrační hladině 4,5, 9,5, 14,8 a 15,5 µmol/l. V sérii bylo měřeno vždy 7 vzorků. Variační koeficienty: 10,76 %, 1,79 %, 3,34 %, 1,21 %, resp. přesnost v čase byla měřena u kontrolních materiálů na koncentračních hladinách 7, 12,5 a 25 µmol/l. Měření bylo opakováno po dobu 5 dnů, během této doby nebyla metoda překalibrována. Variační koeficienty: 3,33 %, 2,89 %, 3,15 %, resp. bias: 108 %, 102 %, 96,5 %, resp. linearita metody byla testována měřením série ředěných vzorků ze vzorku o původní koncentraci 82 µmol/l. Recovery pro: 82, 41, 20,5, 10,2 a 5,1 µmol/l činilo 106 %, 105 %, 108 %, 99 % a 102 %. Na souboru 34 pacientských vzorků jsme srovnávali hodnoty stanovené na obou analyzátorech. Rozsah koncentrací v daném souboru: 1,2–52,6 µmol/l. Párové hodnoty spolu dobře korelovaly, Pearsonův korelační koeficient r = 0,9976, p<0,0001. Regresní rovnice: Y = 0,0049 + 0,9793 X, Y = Hcy (Axsym), X = Hcy (Synchron LX 20). Intercept regresní závislosti se statisticky významně neodlišuje od nuly, p<0,9816, směrnice závislosti se statisticky významně neliší od 1, p = 0,0975. Rozložení diferencí nevykazuje výraznou vazbu na hodnotu měřené veličiny (Bland-Altmanův graf). Závěr: Homogenní enzymatická metoda stanovení homocysteinu firmy Carolina, Liquid Chemistry Corp. je podle našich zkušeností rychlá, jednoduchá a ekonomicky vhodná metoda, dobře použitelná na biochemickém automatickém analyzátoru Synchron LX 20, Beckman Coulter.

        Klíčová slova: tHcy, homogenní enzymatická metoda, stanovení tHcy.