Souhrn:
Byla vypracována velmi citlivá metoda HPLC pro stanovení pentosidinu v moči a v séru. Kapalinový chroma-
tograf firmy Shimadzu, typ CLASS VP verze 5.0 skládající se z autosampleru, kvarternární pumpy, termostatu
kolony a fluorescenčního detektoru byl řízen počítačem pomocí speciálního programu CLASS VP pracujícího
v prostředí Windows 98. Jako stacionární fáze byla použita skleněná kolona typu CGC Separon SGX C18,
rozměrů 150x3 mm, plněná sférickým silikagelem o velikosti částic 7 mm povrchově modifikovaným oktadecylsi-
lanem. Mobilní fází byla 0,02 mol/l heptafluoromáselná kyselina (HFBA) s přídavkem 0,01 mol/l (NH 4)2SO4
a variabilní koncentrací acetonitrilu (ACN). Standard pentosidinu byl syntetizován pomocí jednoduché poly-
meranalogické reakce nevyžadující rafinaci reakčního produktu. Chyba reprodukovatelnosti vlastního stanove-
ní HPLC je mírně nad 1 % (RSD), mez citlivosti je nižší než 20 femtomolů, materiálová výtěžnost (recovery) celé
metody, tj. včetně hydrolýzy a rafinace vzorku, je 77 ± 3,5 %. Metoda byla s velmi dobrým výsledkem ověřena při
analýze modelového vzorku moče a séra.
Klíčová slova:
pentosidin, HPLC, AGE, syntéza pentosidinu, glykace.
|