Souhrn:
Cíl práce: Optimalizovat izolaci RNA z tukové tkáně a ověřit její parametry.
Materiál a metody: Tuková tkáň (cca 100 mg) byla odebrána pacientům při chirurgických výkonech. Vzorek tkáně byl
uchován ve stabilizačním činidle RNAlater. Celková RNA byla izolována následujícími kity: Rneasy Protect Mini,
Rneasy Lipid Tissue (QIAGEN GmbH, Německo) a MagNA Pure Compact RNA Isolation (Tissue) pro přístroj MagNA
Pure Compact Instrument (Roche Diagnostics GmbH, Německo).
Výsledky: Výtěžky RNA byly při použití Rneasy Protect Mini Kit 37,5 ± 20,7 µg/ml (n = 63), Rneasy Lipid Tissue Kit 85,9
± 36,3 µg/ml (n = 29), respektive MagNA Pure Compact RNA Isolation Kit (Tissue) 50,6 ± 13,6 µg/ml (n = 28). Poměry
R260 nm/280 nm byly 1,6–2,0. Validace postupů hodnocená prostřednictvím RT-PCR potvrdila podobnou míru schopnosti
amplifikace vzorků RNA. Přesnost postupu byla do 7 %. Celková RNA nebyla kontaminována DNA až na vzorky
z RNeasy Protect Mini Kit.
Závěr: Rneasy Lipid Tissue Kit a MagNA Pure Compact RNA Isolation Kit (Tissue) splňují požadavky kladené na izolaci
RNA z tukové tkáně. Vzorky RNA jsou vhodné pro další zpracování metodami molekulární biologie.
Klíčová slova:
RNA izolace, beta-2-mikroglobulin, RT-PCR.