Souhrn:
Polymerázová řetězová reakce je dnes běžnou součástí postupů sloužících k identifikaci osob
v soudním lékařství. Tato metoda je jednoduše proveditelná, pozornost však vždy musí být věno-
vána optimalizaci reakčních podmínek a interpretaci výsledků. Z literatury jsou známy případy,
kdy při amplifikaci extrémně malého množství DNA (např. z jediné buňky) došlo během polymerá-
zové řetězové reakce k preferenčnímu namnožení jen jedné ze dvou v templátové DNA přítom-
ných alel. Pokud se amplifikované fragmenty liší délkou, dochází k preferenční amplifikaci
u kratšího z nich, což může být příčinou zavádějících výsledků. V prezentované práci bylo 23
skvrn mužské krve na různých textilních materiálech podrobeno izolaci DNA dvěmi různými
metodami (pomocí proteinázy K a povaření a pomocí Chelexu 100). Získaná DNA byla amplifiko-
vána za použití primerů komplementárních k sekvencím genu pro amelogenin. Systém je vhodný
pro určení pohlaví jedince, neboť namnožením X chromosomální sekvence poskytuje fragment
o délce 632 bp, amplifikací Y chromosomální sekvence fragment o délce 443 bp. Izolační metoda
využívající proteinázy K vedla v 17,38 % vzorků k velmi intenzivní preferenční amplifikaci delší
alely a tím k nesprávnému výsledku. Izolační metoda založená na působení Chelexu 100 poskytla
vždy správný výsledek s jasně patrnou preferenční amplifikací kratší alely. Uvedené výsledky
podtrhují důležitost volby vhodné izolační metody, nutnost pečlivé optimalizace PCR a opatrné
interpretace jejích výstupů.
Klíčová slova:
polymerázová řetězová reakce (PCR) - izolace DNA - identifikace osob - preferenční
amplifikace
|