Prevalence druhů Borrelia burgdorferi sensu lato
u pacientů v České republice; přímá sekvenační
analýza a polymerázová řetězová reakce v reálném čase
Hulínská D., Dřevová H., Votýpka J., Langrová K., Kurzová Z.
Přírodní ohniskovost nákaz, Národní referenční laboratoř pro borreliózu, Státní zdravotní ústav, Praha |
|
Souhrn:
Rozšíření borreliózy závisí na geografických, ekologických a klimatických faktorech, stejně jako na
patogenezi vlastního agens skupiny Borrelia burgdorferi sensu lato. Zájem vzbuzuje nárůst případů
této choroby a objevení nových příznaků. Vztah genodruhů k symptomům, jejich geografické rozšíření
a možnost spolupůsobení dalších patogenů je předmětem naší studie.
Do studie bylo zahrnuto 87 pacientů s borreliózou ze středních, východních Čech a z Moravy.
Pacienti skupiny 1 (celkem 49) byli zařazeni podle pozitivní kliniky, pacienti skupiny 2 (celkem 21)
se rekrutovali z pozitivních screeningovou metodou PCR a pacienti skupiny 3 (celkem 17) byli
pozitivní kultivačně. Celkem 48 pacientů a 17 izolovaných kmenů bylo pozitivních v konvenční
nested PCR pro plazmidy a genom B. burgdorferi sensu lato. Genodruhy a subtypy borrelií byly
prokázány přímou sekvenací OspA a OspC produktů. Kvantitativní data byla determinována pomocí
křivky tání specifického produktu užitím PCR v reálném čase.
Sekvenací fragmentů OspA genu jsme u pacientů ze středních Čech prokázali přítomnost B. garinii,
subtypy 6, 5, 4, 3 v 51,8 % (14 z 27), B. burgdorferi s.s v 29,6 % (8 z 27) a B. afzelii v 18,5 % (5 z 27). Ve
východní oblasti prevalovala B. garinii, subtyp 5 a v 7,6 % byla společná infekce s Anaplasma
phagocytophilum. Prevalence B. afzelii v 44 % (11 z 25) následovaná B. burgdorferi s.s. v 36 % (9 z 25)
a v 20 % zbývající infekcí B. garinii byla u pacientů z Moravy. Sekvence dvou hypervariabilních
oblastí OspC a OspA genů a vzdálenosti sekvencí ve fylogenetických stromech ukázaly rozdíly nejen
mezi genodruhy a subtypy ale i mezi „divokými“ kmeny, prokázanými přímou sekvencí ve vzorcích
pacientů a „arteficiálními“ kmeny, kultivovanými in vitro. Největší rozdíly byly u dlouhodobě
nemocných borreliózou.
Klíčová slova:
borrelióza – PRC v reálném čase – sekvenační analýza.
|