Metoda stanovení intracelulárních proteinů pomocí průtokové cytometrie umožňuje hodnocení produkce různých cytokinů jasně definovanou buňkou (typ subpopulace, stav aktivace buňky). K tomu, aby se metoda mohla stát rutinně používaným funkčním testem, je potřeba ji standardizovat. To bylo cílem naší práce, kdy jsme podle literárních údajů našli všechny sporné body a ty jsme experimentálně řešili. Zcela jednoznačně lze doporučit pouze natrium heparin jako antikoagulační činidlo při vyšetřování plné krve. Práce řeší problémy s výběrem mitogenů, kdy ukazujeme výrazný vliv použití mitogenů na výsledek a nutnost porovnávat výsledky získané pouze za zcela stejných podmínek. Dále jsme testovali možnosti uchování krve před zpracováním a výběr vhodných kombinací povrchových znaků a cytokinů. Při hledání optimální doby kultivace je třeba provést kompromis mezi co nejvyšší možnou produkcí cytokinů (kinetika produkce různých cytokinů je navíc odlišná) a přesností měření, protože detekce molekuly CD4 je po delší době stimulace výrazně horší. Jako optimální navrhujeme 4,5hodinovou kultivaci s phorbol myristat acetátem. Naše výsledky jasně prokazují mnohem vyšší schopnost zadržet nově tvořené cytokiny v buňce, používáme-li brefeldinAnamísto monensinu. Výsledkempráce je standardní protokolpro stanovení intracelulárních cytokinů.

        Klíčová slova: intracelulární cytokiny – mitogeny – inhibitory transportu proteinů.