Abstrakt:
Východisko. Nové biočipové technologie umožňují současné sledování velkého počtu genů včetně semikvantita-
tivního vyhodnocení jejich aktivity. V souvislosti s výzkumným zaměřením oddělění molekulární genetiky Ústavu
hematologie jsme pomocí této nové techniky vyšetřili několik pacientů s diagnózou chronické myeloidní leukémie
(CML), u které za jednu z hlavních patogenních změn je považován vznik fúzního bcr/abl genu, jehož produktem
je protein s konstitutivní tyrozin kinázovou aktivitou, která se vymyká normální regulaci. Cílem studie bylo stanovení
profilu genové exprese buněk periferní krve pacientů s chronickou myeloidní leukémií (s přestavbou bcr/abl) v době
plně rozvinutého, ale ještě neléčeného onemocnění v porovnání s normálními buňkami zdravých osob.
Metody a výsledky. Pro sledování genové exprese jsme využili Atlas Array technologii (firma CLONTECH),
která zahrnuje izolaci RNA, přepis RNA na cDNA za současného radioaktivního značení
32
P. Radioaktivně značená
cDNA byla hybridizována na Atlas Human Cancer cDNA Expression Array s 588 geny. Detekce signálů byla
provedena autoradiograficky a pro vyhodnocení expresní aktivity byl použit software AtlasImage 1.5 (CLONTECH).
Genová exprese byla studována u pěti pacientů s diagnózou CML a jedné kontrolní zdravé osoby. Z periferní krve
byly izolovány leukocyty a u tří pacientů byly leukocyty separovány na granulocyty a mononukleární buňky. Genová
exprese pacientů byla porovnána s genovou expresí kontrolní osoby. Expresní profily pacientů se dosti překrývaly
a my jsme se zaměřili na největší rozdíly v expresi genů ve srovnání s kontrolou. Mezi geny, které u pacientů
vykazovaly shodné změny v expresi, patří c-jun N-terminální kináza, MMP-8, MMP-9, integrin a E, integrin b,
PDGF (zvýšená exprese) a ZAP-70, IRF1, MCL-1, STAT 5B, RARA, CDC25B, RPSA, TNFR (snížená exprese).
Druhou skupinu tvoří geny, jejichž exprese se výrazně lišila od kontroly, ale u pacientů se vyskytují nepravidelně
(„jednotlivě”) - PCNA, MMP-17, CD59, rho G, CRAF1, PIG7 (zvýšená exprese) a notch, caspase 8, caspase 4,
interleukin 6 receptor, rho B, TIMP1 (snížená exprese) atd.
Závěry. Sledování expresních profilů u pacientů se stejnou diagnózou může přispět k odhalení genů, které
participují na rozvoji daného onemocnění. Všeobecně se soudí, že ačkoliv je vznik bcr/abl fúzního genu hlavní
příčinou, není jedinou determinantou určující rozvoj CML. Předkládaná studie vedla k odhalení změn genové
exprese, které byly zřetelně vyjádřeny u všech pacientů a které lze proto považovat za typické, a ukázala změny
vyjádřené jen v některých vzorcích. Ty ukazují na individuální variabilitu.
Klíčová slova:
chronická myeloidní leukémie, genová exprese, array technologie.
|