Východisko. Dynamické mutace lidského genomu jsou novou třídou genových mutací, reprezentovaných nestabilním počtem trinukleotidových opakování, způsobující závažná dědičná neuromuskulární a neurodegenerativní onemocnění u lidí. Identifikace patologických expandovaných alel na molekulární úrovni je důležitá pro klinickou diagnózu. Metody a výsledky. Pro molekulární diagnostiku expandovaných tandemových repeticí trinukleotidových sekvencí jsme zavedli efektivní TP-PCR metodu podleWarnera et al. (13). Pro rychlou detekci expandovaných CTG alel genu DMPK (myotonická dystrofie –MD) jsme tutometodu modifikovali do dvoufázového protokolu; nejprve byly pomocí PCR selektovány vzorky DNA heterozygotů s využitím primerů P1 a P2, ohraničujících trakt s repeticemi, druhé vyšetření metodou TP-PCR bylo zaměřeno především na identifikaci patologické alely. Fluorescenčně značený specifický primer v TP-PCR byl použit pro přesné určení počtu CAGopakování v genu IT-15 (Huntingtonova choroba – HD) v diagnosticky důležité oblasti šedé zóny (rozmezí 35–39 CAG). Reprodukovatelnost výsledků PCR byla ověřena na kontrolních vzorcích DNA o známém genotypu a v případě MD také Southernovou hybridizací. Zejména jsme ukázalimožnost levnějšího PCR-P1/P2 a TP-PCR protokolu, který využívá barvení PCRproduktů separovaných na polyakrylamidových gelech stříbrem. Závěr. Naše zkušenosti se zavedenímvýše uvedených PCRmetod do laboratorní praxe dokumentují obecnémožnosti jejich významného uplatnění pro molekulární diagnostiku dědičných chorob charakterizovaných nestabilitou v trinukleotidových traktech.

        Klíčová slova: neurodegenerativní onemocnění, myotonická dystrofie,Huntingtonova chorea, genDMPK, genIT-15, trinukleotidové repetice, expenze trinukleotidů, Triplet Primed PCR.